最佳答案免疫組織化學(xué)和激光共聚焦掃描顯微鏡冰凍組織冰凍切片（10米厚）被放置在明膠涂層幻燈片和培養(yǎng)15分鐘。100甘氨酸和0.1%羧基牛血清白蛋白（奧利昂，瓦赫寧根大學(xué)，荷蘭）型，PH值7.4。然后冰凍切片孵育過夜的主要對波形蛋白抗體（克隆模式；西格瑪，圣路易斯，鉬，美國）在潮濕室。灰化后在公共電視網(wǎng)，準備培養(yǎng)生物驢抗抗體其次是streptavidin-cy-2（biotrend，科隆，德國）。細胞核染色與0.002%7-aminoactinomycin?。ǚ肿犹结?，卡爾斯巴德，加利福尼亞州，美國）。遺漏的主要抗體作為陰性對照。該immunolabelled切片檢查與tcn-nt徠卡激光顯微鏡，配備氬氪和氦氖激光。系列共聚焦部分采取了通過深入的組織樣本在0.5 -米間隔。為了提高圖像質(zhì)量和獲得高信噪比每個圖像從一系列信號平均。經(jīng)過數(shù)據(jù)采集，圖像被轉(zhuǎn)移到一個硅谷圖形工作站印或辛烷值（硅谷圖形公司，桑尼維爾，加利福尼亞州，美國）的圖像恢復(fù)和重建使用imaris，多通道圖像處理軟件（平面，與ü豐富，瑞士）。該方法的原理和許多圖像獲得這一技術(shù)已先前公布的[ 46，47 ]。在標記的實驗中，冰凍切片孵育過夜的原發(fā)性多克隆抗體（抗c - kit，丹麥，丹麥）驢抗兔抗體之后，加上接觸件（dianova，漢堡，德國）。經(jīng)過反復(fù)沖洗，硫化鉛，準備孵育antivimentin抗體直接耦合與Cy 3。肌原纖維染色的F -肌動蛋白與灼633-conjugated鬼筆環(huán)肽。細胞核染色與4,6-diamidino-2-phenylindole（吲哚）（分子探針）。所有的準備工作都安裝在mowiol（赫斯特，法蘭克福，德國）。經(jīng)典的免疫細胞化學(xué)進行fomalin-fixed，石蠟切片中的卵白素一生物素過氧化物酶復(fù)合物的方法，如以前所報告[ 10]。主要是：CD 34單克隆抗體用于–：100，1，10（biogenex克隆qbend，圣拉蒙，加利福尼亞州，美國）和波形蛋白，單克隆，1 :100，克隆v-9（biogenex）。